Příprava konjugovaných biomolekul s polystyrenovými mikročásticemi pro mikromanipulaci metodami optické pinzety - experimentální práce

Abstract

Biokonjugační reakce jsou dlouhodobě používané k značení biomolekul pomocí fluorescenčních značek, které spojují různé biomolekuly k sobě za vzniku různých povrchů nebo mikroskopických korálků. Během několika desetiletí výzkumu byly vyvinuty metody, které nám umožňují konjugovat různé funkční skupiny různých molekul při mírných změnách reakčních podmínek. Cílem této práce je představit některé z těchto technik a optimalizovat obecně používané metody pro naše specifické účely. Proto jsme zvolili dvě fluorescenční barviva, eosin Y a fluorescein, a pokusili se optimalizovat podmínky jejich konjugace k ethylendiaminu a N-hydroxylsukcimidu za použití moderního karbodiimidu, kondenzační reakcí s N-(3-Dimethylaminopropyl)-N'-ethylcarbodiimide hydrochloride jako kondenzačním činidlem. Reakce byly sledovány pomocí separace agarózovou elektroforézou s následnou fluorescenční detekcí. Tato metoda ukázala očekávaný průběh obou reakcí. Pokus o prokázání reakčního produktu hmotnostní spektrometrií (MS) však selhal, nejspíše z technických důvodů, které je třeba v budoucnu vyřešit. V případě pozdějšího potvrzení syntetizovaného produktu MS, jak produkty, tak optimalizované metody budou použity pro fluorescenční značení biomolekul, které jsou v našem zájmu, a jejich konjugace s polystyrénovými mikročásticemi za účelem manipulace pomocí optických pinzet.